當前位置：首頁 > 產品中心 > 酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（ELISA KIT） > 美國R&D 公司ELISA KIT > Invitrogen美國脂質體2000
產品中心
產品名稱：美國脂質體2000
所屬類別：Invitrogen
產品簡介：美國Invitrogen脂質體操作流程都是又快又簡單
產品詳情
美國Invitrogen脂質體的操作流程
事實上Lipofectamine系列產品操作流程都是又快又簡單：稀釋DNA以及Lipofectamine 2000，混合2種稀釋液保溫20分鐘，加入培養(yǎng)細胞中孵育24－96小時檢測結果。下面是Invitrogen提供的詳細流程和注意事項。
1、轉染前一天，胰酶消化細胞并計數(shù)，細胞鋪板，使其在轉染日密度為90%。細胞鋪板在0.5ml含血清，不含抗生素的正常生長的培養(yǎng)基中。
2、對于每孔細胞，使用50μl無血清培養(yǎng)基（如OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基）稀釋0.8μg-1.0μg DNA。
3、對于每孔細胞，使用50μl OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基稀釋1μl-3μl LIPOFECTAMINE2000試劑。Lipofectamine 2000稀釋后保溫5分鐘（在30分鐘內同稀釋的DNA混合。保溫時間過長會降低活性。） 注意：即使Lipofectamine 2000使用OPTI-MEMⅠ稀釋，細胞也可以使用D-MEM培養(yǎng)。如果D-MEM做為Lipofectamine 2000的稀釋液，必須在5分鐘內同稀釋的DNA混合。
4、混合稀釋的DNA（第2步）和稀釋的Lipofectamine 2000（第3步）。在室溫保溫20分鐘。 注意：溶液可能會混濁，但不會影響轉染。復合物可以在室溫保持6小時穩(wěn)定。
5、直接將復合物加入到每孔中，搖動培養(yǎng)板，輕輕混勻。注意：如果在無血清條件下轉染，使用含血清的正常生長培養(yǎng)基進行細胞鋪板。在加入復合物前移去生長培養(yǎng)基，替換為0.5ml無血清培養(yǎng)基。
6、在37℃，5％的CO2中保溫24-48小時，無須去掉復合物或更換培養(yǎng)基或者在4-5小時后更換生長培養(yǎng)基也不會降低轉染活性。
7、在細胞中加入復合物24-72小時后，分析細胞抽提物或進行原位細胞染色，檢測報告基因活性。這依賴于細胞類型和啟動子活性。對穩(wěn)定表達，在開始轉染一天后將細胞傳代至新鮮培養(yǎng)基中，兩天后加入篩選抗生素。進行穩(wěn)定表達需要數(shù)天或數(shù)周。
8、對于96孔板培養(yǎng)，不再需要提前一天進行細胞鋪板，而可以直接在平板中制備復合物，然后將細胞懸浮液加入到復合物就可以了，這樣進一步減少了轉染時間。這種改進步驟已經過293-H，293-F，COS-7L和CHO細胞的試驗，同傳統(tǒng)方法相比活性稍低?？旖莸牟襟E和蛋白表達細胞系的高效轉染使得Lipofectamine 2000非常適用于96孔板的高通量轉染，比如cDNA文庫的篩選和蛋白瞬時表達。
